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苏州病毒包装公司实验时需要注意什么

作者: 来源: 日期:2019-1-23 9:13:44 人气:340

苏州病毒包装公司在做慢病毒包装实验中,有科研工作者常遇到:用同样一个病毒载体系统进行病毒包装实验,为什么有人做的很好,次次成功,有人却是时常做不出来,稳定性很差,不是滴度低就是根本不出毒? 

苏州病毒包装公司从我们对不同载体系统慢病毒包装的多年经验总结,主要以下几个方面心得:病毒包装的几个关键节点就是细胞因素、载体系统(尽量使用成熟的商业化载体系统)、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制(24、48 小时的细胞及荧光状态判断)、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等都会影响到是否能包装成功)。

苏州病毒包装公司如果有细胞培养和细胞转染实验的常规经验,细胞因素应该没有什么问题(细胞培养人员一定要关注,包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀细胞密度适中否),细胞产毒出毒期间过程中的活力是包装正常和出来的病毒滴度高低的一个重要环节(正常包装出病毒情况,慢病毒、逆转录病毒包装一个细胞出一个病毒颗粒,腺病毒是1000 个,腺相关病毒是10000 个),所以实践操作表明,病毒包装转染时细胞的密度要控制,使得收毒(72 小时)时细胞密度在90%-95%左右。

因而总的来说,我们进行慢病毒包装实验时要重视包装材料——细胞及表达质粒(对拿过来的细胞和载体系统要验证,常出现包装细胞、空表达载体质粒就有问题,我们要定期纯化生产包装细胞、空表达载体质粒),细胞培养时让它“白白胖胖、活力充沛”,目的基因的表达载体构建纯化良好,质粒间比例得当,病毒包装实验还是能有较好的结果。


  
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