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苏州慢病毒包装与纯化实验操作

作者:猪猪 来源: 日期:2019-1-22 16:57:31 人气:326
苏州慢病毒包装与纯化实验操作,慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA/miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。在研究RNAi方面,慢病毒技术是最为有效的一种解决方案。

苏州慢病毒包装特点
1)直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其他原代细胞)。
2)可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。
3)可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。
4)无需任何转染试剂、操作简便。
5)可以根据需要制备多种标记。

苏州慢病毒包装简要流程
1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。
2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。
3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。
4)病毒的纯化和浓缩。
5)分装-80℃保存。
6)滴度测定目的基因鉴定。

苏州慢病毒包装病毒纯化
细胞状态和质粒转染过程决定了病毒的产量,而病毒的纯化方法则决定了病毒的得率和病毒的质量,不同的实验室可根据自身的硬件条件及实验需求选择合适的纯化方案,病毒服务市场的价格多取决于病毒的纯化方法。
I.超滤柱浓缩法
超滤浓缩分离技术,是根据分子的大小来分离溶液中大分子和小分子物质,超滤离心管通过离心力,使溶液中的小分子溶液和溶剂通过滤膜,而大分子溶质则被截留在样品管中。

苏州慢病毒包装基本流程:将含慢病毒上清液转移至超速离心管中,4℃离心5000rpm*30min,浓缩至1ml或更少体积,收集后过滤除菌用于后续实验。
该纯化方法的特点:设备要求低,实验成本低,病毒纯度较差,毒性较高。

该纯化方法的特点:设备要求低,实验成本低,病毒纯度较差,毒性较高。
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