新闻资讯
您的当前位置:首页 - 新闻资讯 - 新闻资讯

苏州病毒包装公司操作及流程

作者: 来源: 日期:2019-1-14 9:53:56 人气:240

重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点:感染范围广,几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织;感染效率高达 100%,可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染;对外源基因容载能力大(可以高达 8Kb);不整合基因组;滴度高,操作方便。因此,重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。

目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36Kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。

苏州病毒包装公司目前最常用的腺病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种,其共同特点是目的基因首先克隆到穿梭载体,然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录复制基因E1和E3的缺陷(ΔE1, ΔE3),其中E3基因对病毒产生并非必需。因此,腺病毒包装必需依赖表达E1的细胞系,例如HEK-293,HEK-293A等。

相对于Adeasy系统,AdMAX系统操作便利,并且可以获得更好的病毒滴度。本操作说明均基于AdMAX系统,该系统由pHBAd系列穿梭质粒、腺病毒骨架载体pBHGlox(delta)E1, 3Cre双载体组成。

苏州病毒包装公司该病毒包装系统为两质粒系统,组成为穿梭质粒(pHBAd系列,包括包括过表达、干扰等类型)和骨架质。若细胞密度持续在 70% 以下,则293A细胞能连续培养3~4个月维持原有的细胞特性。若以购买得到的293A作为第一代,则30代内都能得到最佳结果。随着传代次数的增加,293A细胞会出现生长状态变差、突变等现象。

苏州病毒包装公司为了防止此类现象的出现,我们需要在初始阶段对细胞进行大量的冻存保种,以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存,可增加细胞复苏成活率。为了达到最好的细胞状态,提高腺病毒出毒效率,推荐在培养基中加SaveItTM抗支原体试剂。



 
下一个:苏州滴度测试
亚默生物医学科技有限公司
地址:江苏省苏州市工业园区生物医药产业园A1-302
联系电话:199-5156-9281   技术支持:汇智成科技   苏ICP备54959040号
在线留言联系我们