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苏州慢病毒包装流程及操作

作者: 来源: 日期:2019-1-7 9:58:29 人气:240

重组慢病毒是一种复制缺陷的慢病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。苏州慢病毒包装具有以下几个显著优点:感染范围广,几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织;感染效率高达 100%,可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染;对外源基因容载能力大(可以高达 8Kb);不整合基因组;滴度高,操作方便。因此,重组慢病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。

苏州慢病毒包装目前常用的慢病毒载体基于人慢病毒5型(Ad5),其基因组是36Kb长的线性双链DNA。慢病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。

目前最常用的慢病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种,其共同特点是目的基因首先克隆到穿梭载体,然后再重组到慢病毒的大骨架上。这两个系统均具有慢病毒早期转录复制基因E1和E3的缺陷(ΔE1, ΔE3),其中E3基因对病毒产生并非必需。因此,慢病毒包装必需依赖表达E1的细胞系,例如HEK-293,HEK-293A等。

苏州慢病毒包装相对于Adeasy系统,AdMAX系统操作便利,并且可以获得更好的病毒滴度。本操作说明均基于AdMAX系统,该系统由pHBAd系列穿梭质粒、慢病毒骨架载体pBHGlox(delta)E1, 3Cre双载体组成。

 
 
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