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苏州病毒纯化相关实验过程

作者:猪猪 来源: 日期:2018-12-18 16:11:48 人气:307
苏州病毒纯化相关实验过程,病毒纯化将不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别,沉降速度差别(相差)在一个或几个数量级的粒子,可用本法分离提取。

苏州病毒纯化将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时,由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在,提纯效果不理想。

苏州病毒纯化以差速离心法分离提纯病毒时,经常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其它较大的杂质。然后,选择在 60 min 内能够沉淀 80% 以上的病毒粒子的较高速度,离心 1~2h使病毒沉淀。

(1) 苏州病毒纯化根据病毒的密度选择适宜的溶质,用梯度制备仪制成适宜的梯度介质,病毒的密度好包括在梯度介质的中部或近介质底部 1/3 处。

(2) 将欲纯化的病毒悬液约 1 ml 小心铺加于梯度介质,以 20 000g~40 000 g 离心 2~4 h离心速度和离心时间的选择可根据病毒的大小而定,如流感病毒需 28 000 g,而如乙脑病毒则应40 000g 。

(3) 病毒沉于介质的中部形成一明显的沉淀带,另有若干杂蛋白带。小心吸出病毒并透析后,用生物学方法或电镜检查确定是否为病毒带。
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